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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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原理
原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標(biāo)記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。
經(jīng)特定標(biāo)記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中的待檢DNA片段或mRNA進(jìn)行雜交，然后顯示標(biāo)記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達(dá)。
1、組織取材：組織取材應(yīng)盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養(yǎng)細(xì)胞在30 min 內(nèi)固定。
2、細(xì)胞組織固定目的與注意事項：
（1）保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)；
（2）大限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平；
（3）使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。
常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑不同，多聚甲醛不會與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接，因而不會影響探針穿透入細(xì)胞或組織。
在酵母雙雜交系統(tǒng)中，BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合，如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復(fù)合物，AD與BD會在空間上充分接近，重新構(gòu)成結(jié)構(gòu)域，啟動報告基因的轉(zhuǎn)錄。擁有BD質(zhì)粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長，RNA原位雜交技術(shù)服務(wù)，擁有AD質(zhì)粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長，通過接合（mating）或共轉(zhuǎn)化使酵母同時擁有AD與BD質(zhì)粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用，這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長，并啟動β-半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄。
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第3年
