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分子病理技術服務-科銳諾(在線咨詢)

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意義

免yi組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面:

(1)的診斷與鑒別診斷;

(2)確定轉移性的原發部位;

(3)對某類進行進一步的病理分型;

(4)軟組織的一般需根據正確的組織學分類,因其種類多、組織形態相像,有時難以區分其組織來源,應用多種標志進行組化研究對軟組織的診斷是不可缺少的;

(5)發現微小轉移灶,有助于臨床方案的確定,包括手術范圍的確定。

(6)為臨床提供方案的選擇。

原位雜交天

1. 重新水化和固定

1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。

2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘

3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復一次

4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

蛋白酶處理與后固定(本實驗不做此步)

1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節以下的胚胎不處理,5體節到24小時的胚胎處理3分鐘,24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發育時間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。

2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。

3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。

4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

2. 預雜交

1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。

2)用等體積的HYB+取代HYB-。

3)60℃水浴,預雜交4小時以上。

3. 雜交

1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..

2)60℃ 溫浴過夜。注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結合越好,溫度越高,背景越小。

分子病理學在蛋白質和核酸等生物大分子水平上,應用分子生物學理論、技術及方法研究疾病發生L發展的過程,從而為傳統的病理學注入了生機。在如今的臨床病理診斷過程中,運用核酸原位雜交、PCR技術、免1疫熒光、免1疫組織化學染色等技術,能夠更加深化對疾病的本質認識,分子病理技術服務,對于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導意義。分子病理學診斷主要應用于以下幾個方面:1、對于腫1瘤易感基因的檢測,對于腫1瘤高危人群的篩檢具有實用價值,如檢測GSTπ基因以判定個體暴露于致癌物是的致癌危險性。2、腫1瘤相關病毒的檢測,如采用原位雜交方法檢測標本中HPV、EBER等病毒。

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