意義
免yi組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面:
(1)的診斷與鑒別診斷;
(2)確定轉移性的原發部位;
(3)對某類進行進一步的病理分型;
(4)軟組織的一般需根據正確的組織學分類,因其種類多、組織形態相像,有時難以區分其組織來源,應用多種標志進行組化研究對軟組織的診斷是不可缺少的;
(5)發現微小轉移灶,有助于臨床方案的確定,包括手術范圍的確定。
(6)為臨床提供方案的選擇。
原位雜交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。
2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘
3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復一次
4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
蛋白酶處理與后固定(本實驗不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節以下的胚胎不處理,5體節到24小時的胚胎處理3分鐘,24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發育時間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。
2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。
4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。
2. 預雜交
1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。
2)用等體積的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預雜交4小時以上。
3. 雜交
1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴過夜。注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結合越好,溫度越高,背景越小。
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