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iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation,同位素標記相對和絕1對定量)是由AB SCIEX公司研發(fā)的一種體外同重同位素標記的相對與絕1對定量技術(shù)。該技術(shù)使用8種(或4種)不同的同位素試劑來同時標記和比較8種(或4種)不同的蛋白質(zhì)樣品。這些試劑由3個不同的化學標簽組成:報告部分,肽反應部分和平衡部分。報告部分為客戶可按需選擇標記個數(shù),肽反應基團將iTRAQ標簽與肽段的N-端基團和每個賴氨酸側(cè)鏈相連,可標記所有酶解肽段,平衡部位可保證iTRAQ試劑標記的不同樣本的同一肽段具有相同的質(zhì)荷比,胞外囊泡zetaview技術(shù)服務,因此改變?nèi)我籭TRAQ試劑,不同同位素在標記同一多肽后在一級質(zhì)譜檢測,分子量都完全相同。而在串聯(lián)質(zhì)譜中,同重元素標記肽段平衡基團在二級質(zhì)譜發(fā)生中性丟失。信號離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比的峰,因此,根據(jù)波峰的高度及面積,可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。

外泌體介導細胞間的信號交流,是目前外泌體研究中十分熱門的領(lǐng)域。外泌體中有豐富RNA以及蛋白,其中RNA的種類包括miRNA,LncRNA,mRNA等[1]。大量文獻報道,這些RNA在細胞間的相互交流中發(fā)揮著巨大的作用。如,外泌體中miRNA可以調(diào)節(jié)下游細胞對胰島素的敏感性。在研究中,作者培養(yǎng)脂肪組織巨噬細胞(ATM),并收集培養(yǎng)基中富含miR-155的外泌體,作用于下游的脂肪細胞和肌細胞。miR-155可以結(jié)合Argonaut蛋白,并募集下游的目標mRNA,從而影響細胞對胰島素的敏感性和對葡萄糖的耐受性[2]。此外,外泌體中的LncRNA可以調(diào)控下游細胞的轉(zhuǎn)錄水平[3],mRNA、蛋白等可以通過外泌體轉(zhuǎn)運至下游細胞,并在胞內(nèi)進行翻譯

國際細胞外囊泡學會(ISEV) 在2014年的提議,對于提取獲得的外泌體,需要通過以下手段進行確認:

      雙層囊膜結(jié)構(gòu)是外泌體重要標志之一,但普通光學顯微鏡難以觀察到此種亞顯微結(jié)構(gòu)。而透射電子顯微鏡 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可達0.1 ~ 0.2 nm,可將被觀察物體放大至數(shù)百萬倍,非常適合進行外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀測。

      表觀生物技術(shù)團隊擁有豐富的外泌體電鏡樣本處理與鑒定經(jīng)驗,可為客戶提供高質(zhì)量外泌體TEM檢測服務,獲得樣本中外泌體典型形態(tài)特征圖片 (如圖一)。

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