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考馬斯亮藍法測定蛋白質含量流程:
該方法用于大多數蛋白質的定量是比較精que的,但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0.2%影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1.Bradford濃染液的配制:將100mg考馬斯亮藍G-250溶于50ml 95%乙醇,加入100ml85%的磷酸,然后,用蒸餾水補充至1000ml,此染液放4℃至少6個月保持穩定。
2.標準曲線蛋白質樣本的準備:盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標準品,自貢玻璃水亮藍,例如測定抗ti,可用純化的抗ti作為標準。如果待測樣本是未知的,也可用抗ti作為標準蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之間繪制標準曲線。
3.將待測樣本溶于緩沖溶液中,該緩沖溶液應與制作標準曲線的緩沖溶液相同(hao用PBS)。
4.按1:5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液,如出現沉淀,過濾除去。
5.每個樣本加5ml稀釋的染料結合溶液,作用5~30min。染液與蛋白質結合后,將由紅色變為藍色,在595nm波長下測定其吸光度。注意,顯色反應不得超過30min.
6.根據標準曲線計算待測樣本的濃度。
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亮藍毒理學依據
1.LD50 大鼠口服大于2g/kg體重。
2.ADI 0~12.5mg/kg體重(FAO/WHO,1994)
使用 著色劑。
1.使用注意事項 參見莧菜紅。
2.使用范圍及使用量 我國《食用添加劑使用衛生標準》(GB 2760-1996)規定:可用于高糖果汁(味)、果汁(味)飲料、碳酸飲料、配制酒、糖果、糕點上彩裝;染色櫻桃罐頭(系裝飾用,不宜食用)。用于青梅、蝦(味)片,da使用量0.025g/kg;用于冰淇淋,da使用量0.022g/kg;用于紅綠絲,da使用量0.1g/kg。
亮藍為有金屬質感的淺紫色至古銅色顆粒物或粉末狀,無臭。溶于于水,玻璃水亮藍批發,溶液呈亮藍色;可溶精、丙二醇和凡士林。耐光性性、耐溫性、耐堿性、耐鹽性和耐微生物性非常好,耐酸性和耐氧化還原反應特點。弱酸性時呈青色,強堿時呈黃色,在燒開溶液中呈藍紫色。亮藍的飽和度極強,玻璃水亮藍廠家,一般全是與別的服用添加劑相互配合應用,使用量小,在0.0005%~0.01%中間。裝飾藝術蔬菜水果、可可制品、巧克力朱古力制品(包含可可脂朱古力及制品)及其糖塊(05.01.01可可制品、05.04裝飾設計糖塊、頂飾和甜汁以外)、點心上彩裝。客戶在應用本產品前要認真閱讀GB2760《食用添加劑應用質量標準》,每個純色種類的應用范疇和使用量會大不一樣。
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