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植物組織原位雜交檢測技術服務-武漢科銳諾生物(圖)

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將少數菌落轉移到纖維素濾膜上

(1) 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

(2) 用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上,再轉移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種(或打點)。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。后,在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質粒的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培養至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

(4) 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。

(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒置貯放于4℃,直至獲得雜交反應的結果。

(6) 裂解細菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。

意義

在研究DNA分子原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,植物組織原位雜交檢測技術服務,在適宜的條件下,能過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

分子病理學是一門新興學科,是在基因水平上用分子生物學技術研究疾病發生1發展的一個病理學分支學科。分子病理學進行的檢測通常稱之為基因檢測,即取檢測者的腫1瘤組織、胸水或血液等,經提取和擴增其基因信息后,通過相應的分子生物學技術,對被檢測者細胞中的DNA分子的基因信息進行檢測,分析他的基因狀態,從而對腫1瘤的診斷或治1療提供一定的幫助。 

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