植物原位雜交在遺傳育種方面的應用主要包括:
異源染色質及多種染色體畸變檢測:通過遠緣雜交把有用遺傳物質基因的異源染色質漸滲到植物中。如帶有幾種抗病基因的黑麥1R染色體已被整合到許多高產的小麥品種中。原位雜交技術則是鑒定外源染色體(質)的有效手段。
基因組印記研究:基因組印記是指一個基因的兩條染色體上的DNA序列存在差異。通過植物原位雜交技術,可以檢測到基因組印記的存在和分布,從而幫助確定基因組的進化、遺傳和功能特征。
植物染色體原位雜交是一種重要的分子生物學技術,原位雜交檢測,它可以用來研究植物基因組的結構和功能。該技術利用DNA探針與目標DNA序列的互補性結合,染色體原位雜交,通過熒光或性標記來檢測目標DNA序列在染色體上的位置和數量。
植物染色體原位雜交技術的基本原理是將DNA探針標記上熒光或性同位素,然后將其與目標DNA序列進行雜交。在雜交過程中,探針與目標DNA序列互補結合,形成穩定的雙鏈DNA分子。隨后,通過熒光或性同位素探測技術,可以檢測到目標DNA序列在染色體上的位置和數量。
將32 P標記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,湖北原位雜交,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應蓋嚴,以防液體蒸發。
雜交結束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,熒光原位雜交,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉一次。重復洗 一次,同時應避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
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