直接法
將標記的特異性熒光,直接加在抗原標本上,經一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應的多余熒光,室溫下干燥后封片、鏡檢。
間接法
如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異()與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的,再用標記的抗(第二)與抗原標本反應,使之形成—抗原—復合物,再用水洗去未反應的標記,干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知,則表明抗原標本是已知的,待檢為,其它步驟的抗原檢查相同。
為什么有的基因定位結果與預想的不一致?
對于一個特定的定位載體,只要熒光表達較好,其定位結果是確定的,不會隨人為意愿或操作而改變。至于有時候和預想的結果不一樣,可能和蛋白本身、選擇的表達載體以及熒光蛋白融合方式等有關。
為什么有的普通定位結果出來后無法準確判斷其定位位置?
細胞中的細胞器復雜且多樣,除一些常見的、特征比較明顯的細胞器外,有些細胞器在激光共聚焦下形狀比較相似,例如:線粒體、過氧化物酶體、高爾基體等細胞器,它們的熒光表達形狀可能都是點狀,因此不易區分。這時可以結合基因的其他功能研究來判斷其可能表達的位置。另外,蛋白表達本身也是一個復雜的過程,涉及到多個合成場所及轉運過程,自身表達情況可能比較復雜,因此不易判斷具體的表達位置。
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