外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發表還是各類基1金的申請,外泌體相關研究表現都非常亮眼。外泌體提取后,研究人員面臨的一個重要問題就是,我提取的是不是外泌體?如果是的話,質量如何?
現階段,對外泌體進行鑒定主要有三種主流的方法:電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標物。之前我們已經對外泌體電鏡進行了總結,胞外囊泡粒徑及濃度檢測,今天我們來看看外泌體的粒徑分析。
外泌體粒徑分析原理
外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是對每個顆粒的布朗運動進行追1蹤和分析,結合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學直徑和濃度。NT A技術已被外泌體研究領域認可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式,NT A技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態、檢測速度更快。
除了用NTA方法,該團隊另基于acetylcholinesterase(一種已知的外泌體表達蛋白)評估三種試劑盒提取外泌體的得率。從NTA結果看,對于血1清和血漿樣本,Exo-spin的提取量高,是其他兩種試劑盒的1-3倍;相對來說,腦脊髓液的提取率都比較低,ExoQuick?提取得到的外泌體濃度低。從基于acetylcholinesterase的分析結果看,其數值高于NTA方法,且Exo-spin得到的外泌體濃度高于其他兩種試劑盒。
自噬是一個吞噬自身細胞質蛋白或細胞器并使其包被進入囊泡,并與溶酶體融合形成自噬溶酶體,降解其所包裹的內容物的過程,借此實現細胞本身的代謝需要和某些細胞器的更新。自噬體,其直徑一般為 300 ~ 900 nm,平均 500 nm,囊泡內常見的包含物有胞質成分和某些細胞器如線粒體、內吞體、過氧化物酶體等。與其他細胞器相比,自噬體的半衰期很短,只有 8 min 左右,說明自噬是細胞對于環境變化的有效反應。
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