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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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| 先生： |
外泌體研究開展的如火如荼。不論是 SCI 文章的發(fā)表還是各類基1金的申請，外泌體相關(guān)研究表現(xiàn)都非常亮眼。外泌體提取后，研究人員面臨的一個(gè)重要問題就是，我提取的是不是外泌體？如果是的話，質(zhì)量如何？
現(xiàn)階段，對外泌體進(jìn)行鑒定主要有三種主流的方法：電鏡、粒徑和 Western blot 分析靶標(biāo)物。之前我們已經(jīng)對外泌體電鏡進(jìn)行了總結(jié)，胞外囊泡粒徑及濃度檢測，今天我們來看看外泌體的粒徑分析。
外泌體粒徑分析原理
外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle tracking Analysis， NT A)，其原理是對每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動進(jìn)行追1蹤和分析，結(jié)合 Stockes-Einstein 方程式計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NT A技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式，NT A技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。
外泌體的提取方式：
1、離心法：此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足。
2、過濾離心：這種操作簡單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣純度不足。
3、密度梯度離心法：用此種方法分離到的外泌體純度較高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜
4、免1疫磁珠法：這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單，但生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性。
5、色譜法：此種方法分離出的外泌體大小均一，但設(shè)備特殊，應(yīng)用不廣泛。
據(jù)國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會（ISEV）在2014年的提議，外泌體鑒定3個(gè)標(biāo)志：透射電鏡（transmission electron microscope，TEM）、粒徑（Nanoparticle Tracking Analysis， NTA）、蛋白標(biāo)志物（Western Blot， WB）。
外泌體透射電鏡TEM鑒定外泌體大小、形態(tài)，判斷樣本是否含有外泌體。
外泌體透射電鏡分辨率為0.1~0.2nm，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，可觀測樣本中是否存在外泌體樣結(jié)構(gòu)（通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形），同時(shí)可測量外泌體大小。
檢測平臺：TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN
檢測結(jié)果：三張透射電鏡圖片，盡可能體現(xiàn)完整的外泌體形態(tài)（如有）
檢測周期：10-15個(gè)工作日
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第4年
