原位雜交
實驗原理
原位雜交技術(in situhybridization)是以標記的核酸分子為探針,在組織細胞原位檢測特異核酸分子的技術。
使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交,再以自顯影或細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
染色體原位雜交實驗的基本原理是利用特定標記的已知堿基序列的核酸探針,依據堿基互補配對原理,與中期染色體玻片標本中的同源 DNA 序列進行雜交。
標記可以用放1射性同位素(3H、35S、32P),然后進行放1射自顯影;也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛,再用熒光顯微鏡進行觀察,即熒光原位雜交(fluorescent in situhybridization,FISH)技術。
在酵母雙雜交系統中,BD與X蛋白融合,AD與Y蛋白融合,植物葉片原位雜交技術服務,如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復合物,AD與BD會在空間上充分接近,重新構成結構域,啟動報告基因的轉錄。擁有BD質粒的酵母可以在某一缺陷培養基上生長,擁有AD質粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養基上生長,通過接合(mating)或共轉化使酵母同時擁有AD與BD質粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用,這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養基上生長,并啟動β-半乳糖苷酶基因的轉錄。
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