鐵死亡主要有以下幾個特點:
① 鐵死亡,外泌體質譜檢測,細胞死亡過程中伴隨著大量的鐵離子的累積,同時還會出現脂質過氧化,ROS升高,也有一些調控鐵穩態和脂質過氧化代謝等方面的基因發生變化,
② 鐵死亡,在細胞的細微結構中,會出現比正常細胞小的線粒體,且線粒體膜皺縮,外泌體質譜服務,同時線粒體嵴減少或消失,外膜破碎,但細胞核中形態變化不明顯。
外泌體上的TNF家族蛋白不能被膜型金屬蛋白酶切割,故較為穩定,同時借助膜形成三聚體,具有很強的誘導細胞凋亡的活性。而且,人們認為外泌體的轉運TNF家族蛋白,與各種炎1癥疾病和自身免1疫疾病的產生相關。
例如,從類風1濕關1節炎患者的滑膜成纖維細胞中釋放出來的外泌體上,聚集高濃度的膜結合型TNF-α,會加重類風1濕關1節炎病情。
外泌體分離提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速離心法;
適用于細胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品;
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法;
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品;
3、超濾提取法;
適用于細菌培養液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法,做進一步的提取。
外泌體是細胞外囊泡的一種,其膜來源與粒徑范圍與細胞外囊泡相似,電鏡下,外泌體質譜,顯示出典型的茶托狀超微結構。實際操作中,通過常規的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態、粒徑、表面分子標記物等多方面的鑒定。具體方法包括:透射電鏡(形態鑒定)、NTA檢測(粒徑及濃度鑒定)、WB(分子標志物)。NTA檢測作為外泌體鑒定的經典方法之一,可同時反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質量較好,純度較高的外泌體樣品,粒徑分布在30-150nm,原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質量,外泌體質譜測試服務,對每一個樣品,都會進行3次技術重復。檢測周期為2-3個工作日,可當天到樣當天出結果。
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