湖北植物組織原位雜交-武漢貝科新肽(圖)
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武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營業務:原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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- 公司地址:湖北省武漢市洪山區關山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號
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根據核酸探針標記物的種類分別進行自顯影或利用酶檢測系統進行不同顯色處理。細胞或組織的原位雜交切片在顯示后均可進行半定量的測定,如自顯影可利用人工或計算機輔助的圖象分析檢測儀(computer-assisted image analysis)檢測銀粒的數量和分布的差異。非性核酸探針雜交的細胞或組織可利用酶檢測系統顯色,然后利用顯微分光光度計或圖像分析儀對不同類型和數量的核酸的顯色強度進行檢測。

雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,植物組織原位雜交,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。

預雜交
1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。
2)用等體積的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預雜交4小時以上。
雜交
1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴過夜。
注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結合越好,溫度越高,背景越小。

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