GFP是綠色熒光蛋白,在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發出綠色熒光,從而可以地定位蛋白質的位置。綠色螢光蛋白(GFP)是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質,從藍光到紫外線都能使其激發,湖北亞細胞定位,發出綠色熒光。通過基因工程技術,綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組,在后代中持續表達,蛋白亞細胞定位,并且能根據啟動子特異性地表達。
使用GFP必須構建融合蛋白載體,并在轉染之后有效表達。這樣,若在熒光顯微鏡下看到細胞內某一部位存在GFP信號,說明和GFP融合的蛋白也存在于該部位,這樣就達到了確定某物質亞細胞定位的目的。
洋蔥亞細胞定位的方法包括但不限于以下三種:
熒光法:利用抗原與的特異性結合,在細胞內產生熒光標記,從而確定細胞內抗原的分布位置。
GFP融合蛋白表達法:將目的蛋白與綠色熒光蛋白(GFP)融合,通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達位置。
亞細胞分離法:通過一定的物理或化學方法,將細胞進行破碎,然后通過離心、密度梯度離心等方法將細胞器分離出來,再對分離出來的各個細胞器進行成分和結構分析。
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